商场卫生检测中准确测量空气中微生物浓度及种类的方法

一、采样方法

采样是准确测量的第一步，常见的采样方法有以下几种：

1. 自然沉降法

准备好营养琼脂平板，将其置于商场不同区域、不同高度的采样点，打开平板盖暴露一定时间，一般为5 - 10分钟。空气中的微生物会自然沉降到琼脂表面，然后盖上平板盖，置于合适温度（通常为37℃）的恒温培养箱中培养24 - 48小时。该方法操作简单，但不能准确反映空气中微生物的实际浓度，只能作为粗略的参考。

2. 撞击法

利用空气采样器，使空气以一定速度通过采样器的狭缝或小孔，将空气中的微生物撞击到含有培养基的平板上。常见的有安德森六级空气采样器，它可以将不同粒径的微生物分别收集在六级不同的平板上，从而更准确地模拟呼吸道不同部位对微生物的捕获情况。采样后，同样将平板进行培养。此方法能较好地模拟人体呼吸道对微生物的捕获，采样效率高。

3. 过滤法

让一定量的空气通过过滤膜，微生物会被截留在过滤膜上。将过滤膜转移到合适的培养基上进行培养。这种方法适用于收集空气中的病毒和一些小型微生物，但其操作相对复杂，且对过滤膜的选择和处理有一定要求。

二、微生物浓度测定

培养完成后，通过对培养基上生长的菌落进行计数来确定空气中微生物的浓度。

1. 菌落计数法

在培养平板上，肉眼直接观察并计数生长的菌落数量。对于菌落分布较为均匀的平板，可以采用对角线法、棋盘格法等进行计数，以提高计数的准确性。根据采样体积和菌落数量，计算出单位体积空气中的微生物数量，即微生物浓度。例如，用撞击法采样，已知采样体积为V升，平板上生长的菌落数为N个，则空气中微生物浓度（CFU/m³）= N / (V×10⁻³) 。

2. 分光光度法

对于一些可以在液体培养基中培养的微生物，也可以通过分光光度计测定培养液的吸光度来间接测定微生物的浓度。在一定范围内，微生物浓度与吸光度呈线性关系，通过制作标准曲线，可以根据吸光度值计算出微生物的浓度。这种方法适用于快速批量检测，但需要有合适的标准品进行校准。

三、微生物种类鉴定

确定微生物的种类对于评估商场卫生状况和采取针对性的防控措施非常重要。

1. 形态学鉴定

通过显微镜观察微生物的形态特征，如细菌的大小、形状（球状、杆状、螺旋状等）、染色特性（革兰氏染色、抗酸染色等），真菌的菌丝形态、孢子特征等。形态学鉴定是一种初步的鉴定方法，虽然不能准确到种，但可以大致判断微生物的类群，为进一步的鉴定提供线索。

2. 生化鉴定

利用微生物对不同底物的代谢能力差异进行鉴定。例如，通过检测细菌对糖类、氨基酸等物质的发酵或分解情况，来判断细菌的种类。常见的生化鉴定方法有API系列生化鉴定系统等，它可以对多种细菌进行较为准确的鉴定，但操作较为繁琐，且需要一定的专业知识。

3. 分子生物学鉴定

提取微生物的DNA，通过PCR扩增特定的基因片段，如16S rRNA基因（用于细菌鉴定）、18S rRNA基因（用于真菌鉴定），然后进行测序和比对。将测序结果与基因数据库中的已知序列进行比对，从而确定微生物的种类。分子生物学鉴定具有准确性高、灵敏度高的优点，能够鉴定一些难以通过传统方法鉴定的微生物，但设备和试剂成本较高。

在实际的商场卫生检测中，为了获得准确可靠的结果，通常会综合运用多种采样和鉴定方法，并严格按照相关的标准和规范进行操作。